肝细胞癌（HCC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内占所有癌症发病率的第5位（我国第4位），且发病率仍在逐年上升，死亡率居第3位。在过去十年中，基因组学和蛋白质组学平台以及生物标志物测定技术的进步已经开发了许多新的生物标志物并且改善了HCC的诊断。这些生物标志物不仅可用于HCC的早期诊断，还可驱动肿瘤发生机制的深入了解。此外，这种分子洞察力为更有效的治疗策略的发展奠定了基础。本推送主要介绍除AFP以外的肝癌诊断蛋白标志物，并以NMPA批准试剂盒看目前的产业化情况。
肝细胞癌的诊断现状
肝细胞癌（HCC）是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内占所有癌症发病率的第5位（我国第4位），且发病率仍在逐年上升，死亡率居第3位。肿瘤标志物的实验室检测对于HCC的早期监测、治疗监督和预后判断有着极大的指导意义。HCC术后复发率高达70%，5年生存率不足20%，其主要原因是缺乏早期诊断及有效的治疗手段。随着人们对HCC的深入研究，与HCC相关的生物标志物层出不穷，但这些生物标志物在临床上取得的进展是有限的。
下图展示了肝细胞癌HCC的诊断推荐路径。从中可以看到，目前肝细胞癌的诊断方法还高度依赖于超声（Ultrasound），CT和MRI。AFP推荐用于肝硬化大于2cm时，用于确诊HCC时使用。因此，人们仍然致力于寻找AFP以外的肝癌标志物，以期提高肝癌诊断阳性率。
中国临床肿瘤学会针对HCC的筛查指南也推荐使用AFP和超声结合的方式进行筛查，必要时可配合CT\MRI\DSA等。
肝细胞癌的早筛方法
目前常用的肝癌早期筛查方法有：肝胆胰脾B超、化验肝功能、血常规、AFP肿瘤指标物等。建议有乙肝病史、丙肝及酒精性肝硬化、B超及CT或MRI提示肝脏占位、化验AFP高等患者都需要每年做一次健康检查。对有可疑情况的，需要做进一步的检查项目来排查癌症。然而，由于炎症和肝硬化的共存，HCC的早期诊断变得非常复杂。迫切需要将HCC与炎症和肝硬化区分开的生物标志物，以增强这些患者的预后。
之前的推送介绍了目前国内外主要企业甲胎蛋白AFP检测技术和平台介绍。迄今为止，AFP仍是诊断原发性肝癌最特异的标志，其在肝癌诊断、判断疗效、估计预后、预报复发等方面的价值较为肯定。但尚有约30%的原发性肝瘤患者其血清AFP为阴性，另外，良性肝病、转移性肝癌及胚胎细胞瘤等血清AFP也可增高。
在过去十年中，基因组学和蛋白质组学平台以及生物标志物测定技术的进步已经开发了许多新的生物标志物并且改善了HCC的诊断。这些生物标志物不仅可用于HCC的早期诊断，还可驱动肿瘤发生机制的深入了解。此外，这种分子洞察力为更有效的治疗策略的发展奠定了基础。
肝癌诊断标志物及其试剂盒 AFP-L3 Taketa等发现原发性肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）患者血清中AFP与小扁豆素（lensculinaris agglutinin，LCA）结合后，电泳分成三带，依次命名为AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，即LCA非结合型（AFP-L1、AFP-L2）和LCA结合型（AFP-L3）。对比分析显示HCC患者AFP-L3比率比其它良性肝病患者明显升高。现通常把与小扁豆素结合的AFP-L3称为AFP异质体，它是新一代的肿瘤标志物。 大量研究表明，AFP - L3是检测肝癌的一种特异性指标，但由于肝细胞的再生从而引起AFP也会随之产生，在一定程度上会对诊断结果造成一定的影响，而AFP - L3是肝癌细胞所特有的一种物质，这可以作为肝癌良恶性的一个判断指标，这大大提高了肝癌的检查率，对于肝癌的早发现早治疗有着重要的意义。 目前北京热景生物有甲胎蛋白异质体比率（AFP-L3%）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）及其亲和吸附离心管。该试剂盒主要用于体外定量测定人血清、血浆样本中甲胎蛋白异质体（AFP-L3）占总甲胎蛋白（AFP）的比率（AFP-L3%）。国外企业有Wako Pure Chemical Industries，Ltd甲胎蛋白及其异质体比率测定试剂盒（免疫荧光法），本产品用于体外定量测定人血清中的甲胎蛋白（AFP）及其异质体比率（AFP-L3%）。
异常凝血酶原（DCP）
异常凝血酶原（DCP）亦称为维生素K缺乏或拮抗剂-Ⅱ诱导产生的蛋白（PIVKA-ǁ），它是肝脏合成的无凝血活性的异常凝血酶原。正常凝血酶原是在肝细胞微粒体内产生的。这些凝血酶原的产生需要维生素K的参与。但是，癌变的肝细胞对维生素K的摄取和利用发生了障碍，产生了一种异常的凝血酶原。这种异常的凝血酶原还具有刺激肿瘤生长、转移和癌症组织血管细胞增生的作用。血清脱γ羧基凝血酶原阳性提示可能是肝细胞癌发生。 目前，国外的指南已将 PIVKA-II 列为肝癌检测极其重要的指标。亚太肝病学会、日本肝病学会均已将 PIVKA-II 写入指南中，推荐用于高危人群的筛查、肝癌的辅助诊断、监测治疗效果，并作为预后和复发的预测工具。而在中国，最新版本的《2015 慢性乙肝防治指南》也已将 PIVKA-II 列为肝癌筛查的重要指标。 目前国内企业有北京热景生物的两项试剂盒，分别使用酶联免疫吸附法和磁微粒化学发光法，用于体外定量检测人血清样本中异常凝血酶原的含量。国外企业中，Wako Pure Chemical Industries，Ltd使用免疫荧光法进行检测，富士瑞必欧株式会社使用化学发光法进行检测，雅培使用磁微粒化学发光法进行检测，日本东曹株式会社使用荧光磁微粒酶免法进行检测。
高尔基体蛋白-73（GP73）
高尔基体蛋白 73（ Golgi protein 73，GP73） 是存在于高尔基体上的一种跨膜蛋白，分子量为73 kD，最早由 Kladney 等在 2000年报道。不同情况下 GP73 的分布与来源具有一定的差异性。正常生理情况下人体肝细胞中几乎不表达 GP73，而在胆管上皮细胞、结肠表面高分化腺体细胞、支气管纤毛柱状上皮细胞、肾脏远曲小管和集合管上皮细胞、前列腺腺体上皮细胞中以低水平持续表达。 目前国内企业有北京热景生物的化学发光法、上转发光法、酶联免疫法三种测试试剂盒，海南众森生物的酶联免疫法测试试剂盒。目前较为推荐的方法是使用AFP、DCP、AFP-L3三项联合检测，配合影像学诊断，可大大提高肝癌的早期诊断率。
磷脂酰基醇蛋白聚糖3（GPC-3）
GPC-3是一种细胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白，在正常人肝脏中并不表达，在HCC患者中明显高于良性肝脏疾病患者，因此其有助于HCC的早期诊断和良恶性肝肿瘤的鉴别诊断。GPC-3在小肝癌的检测方面敏感度优于AFP。但目前暂无用于体外诊断的试剂盒销售，只有用于科研的相关试剂盒。 鳞状细胞癌抗原（SCCA） 在之前介绍宫颈癌的过程中，SCCA作为宫颈癌常用的生物标志物并且被广泛的应用于宫颈癌的检测。SCC参与正常和恶变时的蛋白分解调控，使肿瘤细胞免于凋亡作用。由于SCCA表达为去分化的结果，因此它被认为是HCC的潜在标志物。目前，SCCA的高灵敏度和低特异性可作为AFP的补充，使SCCA有潜力成为诊断HCC的有补充标志物。目前有新产业、安图、透景、科美、华科泰、博奥赛斯、威高、裕隆、长光华医、大成、泽成、豪迈、联合泰克等国内企业注册有相关试剂盒，除透景使用流式荧光法外，其他厂家都使用化学发光。 其它蛋白标志物 其他蛋白类标志物如骨桥蛋白OPN，硫氧还蛋白TRXs，AXL，中期因子MDK，可溶性尿激酶纤溶酶原激活物受体suPAR，膜联蛋白A2，磷脂酰肌醇-3和α-L-岩藻糖苷酶AFU等都是目前有相关报道的肝癌标志物，除了α-L-岩藻糖苷酶AFU外，其它指标并没有查到相关注册试剂盒用于体外诊断。 其它类型标志物 除此以外，肝癌的核酸标志物，特别是miRNA、CTCs、外泌体等检测标志物的发展为肝癌的早期诊断带来了新的机遇。这种利用血液循环系统中游离的肿瘤物质进行肿瘤检测是目前非常具有前景的肿瘤检测方法，基本上每个月CNS及其子刊都会有相关技术或者标志物的突破。基因测序、基因芯片、微流控芯片、质谱等技术的发展为液体活检、癌症基因诊断带来了新的动力。但不得不说的是，目前肿瘤的诊断还高度依赖医学成像系统，而国产医学成像系统的进口替代似乎更加艰难。
